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DUO-FLOW操作注意事項
發表日期:2012-06-29
 

層析儀是精密的儀器,流動相中的不溶物、緩沖液中鹽的析出、流動相中的氣泡、儀器管道或閥門內長菌或微生物都會影響儀器的壽命或性能,在操作過程中對有關方面應該特別注意,正確使用儀器以保證發揮儀器良好的性能並延長儀器壽命。儀器使用前應仔細閱讀操作手冊。

一、樣品和緩沖液准備

HPLC級試劑配制緩沖液和樣品,並根據樣品量選擇合適的裝置嚴格過濾和脫氣。過濾應用不大于0.2?m孔徑的合適材料的濾膜,溶液體積較大或顆粒物較多可以先用較粗濾膜過濾,再精細過濾。流動相存在不溶顆粒物會堵塞管道和柱子,磨損泵頭、閥門;樣品或流動相不經脫氣處理容易産生氣泡,影響流速的精確性、柱子的分辨率、檢測器檢測結果的准確性和穩定性。

二、開機前檢查儀器連接狀態並用緩沖液充滿管道

1. 檢查儀器管道連接是否正確,一般爲:緩沖液泵頭混合器進樣閥柱子紫外檢測器電導檢測器pH檢測器組分收集器,特殊配置參考儀器或相關部件操作手冊儀器連接部分。

2. 10ml注射器插入泵頭正面柱塞孔,逆時針擰松柱塞,緩慢吸出液體直至沒有氣泡,擰緊柱塞。同樣方法處理另外一個泵頭。這時緩沖液即充滿泵頭。(如果配置有Maximizer, 應該分別開啓閥門A1A2B1B2並在相應管道充滿溶液)。層析泵沒有溶液空轉會磨損泵活塞,影響泵的精確性和泵的壽命。

3. 儀器開機前用注射器吸入去離子水,分別注入泵頭上部兩個小孔清洗泵頭活塞後部,每個小孔至少清洗10ml, 保持泵頭活塞後部濕潤,防止緩沖液中析出鹽磨損泵頭柱塞墊片或阻塞泵的運轉。儀器使用過程中至少每天要洗滌一次,經常進行該操作會大大延長泵頭壽命。關機時也要進行該操作,維持泵後潔淨。

 

三、開機、設置重要參數、程序編制和運行樣品

1. 打開檢測器(QuadTec是獨立電源)、收集器、層析儀電源開關,打開計算機,先啓動Biologic Configuration檢查泵頭、收集器、層析工作站等的設置是否正確,然後啓動Biologic DuoFlow軟件。計算機會自動檢測閥門、檢測器等有關部件。

2. 根據所用柱子說明書提供的耐壓極限設置泵的壓力限制(但壓力不要超過泵的最大壓力範圍,F10泵頭3500psi, F40泵頭1000psi),壓力超過柱子的耐壓極限會損壞柱子。

3. 如果使用pH檢測器,每次使用前根據使用緩沖液pH範圍用相應標准緩沖液(pH 4pH 7pH 7pH 10)按軟件校正程序進行校正。使用Maximizer時還要進行鹽濃度的單點或兩點校正(用精密pH計)。pH檢測器不用時應將電極從流通池中取出,保存在隨機帶的緩沖液(或pH 43.5M KCL溶液)中,避免蛋白、鹽類等物質黏附或析出在電極上,以延長電極壽命。電極必須在緩沖液中保存,不可以幹置。

4. 如果分離樣品(特別是微量樣品)需要收集,程序編制時注意設置延遲收集體積(delay volume, 一般200?l左右,是從紫外檢測器到收集器滴頭一段管道加上包含的流通池自身死體積的體積,管道體積可以量出長度根據操作手冊提供的管道參數算出,流通池死體積可以從說明書中查出),以使對樣品的收集與紫外檢測結果精確對應。

5. 用有關緩沖液清洗和平衡柱子,紫外(紫外燈本身需要一段時間穩定)和電導基線走穩後可以開始走樣。上樣前要把上樣閥置于load位置,上樣後在程序執行到inject步驟之前上樣注射器不要拔掉,否則樣品會因爲重力緣故從上樣閥廢液出口流出。

6. 在上不同樣品時,應特別注意清洗上樣閥的Loadinjectpurge位置,避免樣品的交叉汙染。

7. 程序結束後注意熄滅紫外燈以延長其壽命。

 

四、關機時儀器的維護

1. 柱子使用完畢後應按柱子使用說明書有關程序徹底清洗或再生,並用合適的緩沖液保存,防止長菌和幹涸。

2. 儀器使用完畢後如果放置過夜,應用低鹽緩沖液(最好是去離子水)徹底清洗所有管道和閥門,包括緩沖液選擇閥、Maximizer4个比例阀、上样阀、收集换向阀等的各个位置,防止盐析出堵塞管道、损坏泵頭和阀门。仪器不可以在管道内是高盐缓冲液时放置过夜,高温天气尤其要注意。

3. 如果儀器一段時間不用,用去離子水清洗後(特別注意上樣閥Loadinjectpurge沾染高濃度蛋白易長菌位置的清洗),再用20%乙醇或0.05%疊氮化鈉溶液充滿管道,長期不用要把泵、閥門、檢測器等出入口用隨機帶的塞子(fittings)封閉以免溶液揮發。防止儀器管道閥門內部長菌或微生物,高溫天氣尤其要注意。長菌或微生物後很難除去。

4. 儀器存放應置幹燥通風環境,防止儀器長黴菌或鏽蝕。如果儀器放在低溫環境(冷室或層析櫃),不要關閉電源,防止水蒸氣凝結。

 

五、常見問題處理(詳見儀器手冊Troubleshooting 部分)。

1. 仪器使用过程中常遇到如下问题:⑴压力读数或流量脉动,可能是气泡滞陷在泵頭,参考仪器手册赶出气泡;⑵紫外基线脉动或噪音过大,可能是气泡滞陷在检测池;⑶反压过大,可能是管道堵塞或柱子需要清洗。取下柱子,如果反压仍过大,需清洗管道和阀门(可以从泵开始逐段检查找出堵塞处),否则按柱子说明书清洗或再生柱子。

2. 最好聯系儀器管理員處理有關問題。

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