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美國Bio-Rad Trans-Blot SD型半干转印系统
發表日期:2012-06-28
 

一.簡介

美國Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干转印系统是在电场的作用下把聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶上的蛋白或核酸条带转移到硝酸纤维素膜上,其运用了电泳检测的方法,使得蛋白或核酸从凝胶中进行分离转移到硝酸纤维素膜上,由于硝酸纤维素膜的可支撑性,使得蛋白或核酸条带能够在电泳后继续做杂交等后续检测的实验,是一种普通,简单,快速的转印方法。该系统无需缓冲液池或凝胶盒,可达到快速、有效、经济的转印目的。平板电极提供一致可靠的转移,可转移多块凝胶,安装快速方便。

二.用途

主要應用于分子生物學實驗,定量和定性分析基因表達,和特定蛋白質表達,用于相關的Northern雜交、Southern雜交和Western雜交分析方法,可在10-35分鍾內完成。

1.       半干转印槽;2. PowerPac通用电泳仪

三.使用:

准備緩沖液、凝膠

1.根據凝膠平衡、三明治裝置、電泳過程等所需要的緩沖液用量准備足夠的緩沖液。

2.使用去離子水浸潤凝膠,並在轉印緩沖液中平衡15min。

所用凝膠須在緩沖液中平衡,除去電泳過程中所帶的鹽分;在轉印過程中,這些鹽會引起轉印緩沖液導電性升高,産生大量的焦耳熱。不同濃度的凝膠和不同的緩沖液組分,會引起凝膠的收縮和膨脹,因此平衡過程可以使凝膠調整到電轉印前最佳的尺寸大小。當電泳緩沖液和轉印緩沖液組分相同時,可不進行平衡過程(如,非變性凝膠)。將凝膠、印記膜夾放在兩層濾紙中間形成三明治結構。

如果使用超厚濾紙,每側則只需要1張;如果使用超厚或薄的濾紙,每側則需要2-3張。

半幹轉印系統中,濾紙起到存儲電轉印緩沖液的作用,因此用量的多少非常重要。爲避免汙染,請佩戴手套接觸凝膠、印記膜和濾紙。

3.相對于每一張凝膠,需要按尺寸裁減出一張印記膜、兩到六張濾紙。Bio-Rad公司提供了預切膜和濾紙。

4.在電轉印緩沖液中潤濕濾紙。

5.將印記膜放入電轉印緩沖液中平衡。組裝三明治結構前,膜必須全部浸潤。硝酸纖維素膜可直接在轉印緩沖液中平衡;首先PVDF膜需要100%甲醇浸潤後,再在緩沖液中平衡。

6.小心打開安全蓋,取下陰極裝置。

7.將預先潤濕的超厚濾紙平房在陽極板上,用滾筒驅趕氣泡。如果使用厚或薄的濾紙,則疊加2-3張濕潤的濾紙,並驅趕氣泡。

8.將預先浸潤的印記膜小心放在濾紙上,驅趕氣泡。

9.將平衡後的凝膠放在印記膜上,將凝膠放在印記膜中央,如果凝膠超出印記膜外有所偏離,將不能達到全部轉印,要裁剪同樣尺寸的印記膜和濾紙。

放置後盡量不要移動轉印膜,以防止産生玷汙印記和人爲印迹。用滾筒驅趕氣泡,使凝膠和印記膜完全接觸。

10.在凝膠上方放入另外一塊潤濕後的超厚濾紙;如果使用厚或薄的濾紙,則疊放2-3張潤濕後的濾紙,並驅趕氣泡。擦幹凝膠/印迹膜三明治結構外過量的緩沖液,以防止電流泄漏。

11.小心蓋上陰極蓋。

12.加蓋裝置的安全蓋。

轉印過程

13.接通電源,設置電泳儀參數,Mini-凝膠:10-15V/5.5mA/cm2, 10-30min;

大凝胶:15-25 V/5.5mA/cm2, 30-60min,开始轉印過程。

14.轉印結束後關閉電源,取下轉印夾,拆卸凝膠三明治裝配,用ddH2O清洗印記膜,確保膜上無剩余凝膠和樣品,之後進行樣品檢測、成像。

 

 

 

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