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Whole Gel Eluter及 Mini Gel Eluter全胶洗脫仪安裝使用指南
發表日期:2012-06-28
 

Gel Eluter全胶洗脫仪通过电洗脫从整块的凝胶中洗脫和收集多个生物大分子条带。

安裝

1.將底座放置于一水平桌面,用水平儀(隨機附件)觀察水平狀況,可通過底座下的螺絲調節。裝上下平板電極

2.將預先剪好尺寸的濾紙用洗脫緩沖液打濕,平放在下平板電極上

3.將預先剪好尺寸的玻璃紙(或透析紙)用洗脫緩沖打濕,放在濾紙上。用小滾筒(隨機附件)去除氣泡

4.放上洗脫槽模塊,根據槽上數字(十字交叉)順序擰緊螺絲

5.倒轉整個模塊,將在螺絲擰緊過程中擠出的多余緩沖液搖掉

6.在洗脫槽中倒入緩沖液,充滿所有的小槽,小心去掉在槽內的氣泡

7.戴上幹淨手套,將要洗脫的膠(凝膠先在洗脫緩沖液中平衡15-20min)放在一幹淨的水平面上,把切膠模板放置其上。切膠模板用來確定膠上要洗脫的部分。切膠模板是透明的,上有數字標尺,通過它可對齊染色前沿和分子量標准

8.小心用刀片下劃,切下切膠模板內的凝膠。注意保證切下邊緣齊平,這有助于提高實驗的重複性,有了經驗後,可以保證多次切取之間的高重複性

9.拿起切好的凝膠一邊,小心放到洗脫槽內,保持蛋白條帶和小槽是水平的。注意不要有氣泡

10.將預先剪好尺寸的濾紙用洗脫緩沖打濕,放在膠上。用小滾筒去除氣泡

11.吸去多余的緩沖液,擦幹收集孔部分,封上封邊帶(隨即附件)或透明膠帶,封緊

12.放上上平板電極,輕輕合上卡鎖

13.放上蓋子,注意蓋子只能在一個正確方向上合上

洗脫

14.將蓋子的電源線和電泳儀連接,注意正負極(正對正,負對負)。

常用洗脫条件如下:

标准型(Whole Gel Eluetr)    恒流200-250mA     10-30min

迷你型(Mini Gel Elueter)      恒流75-100mA      10-30min

不同样品及洗脫缓冲液会影响最佳洗脫条件,需在实验中具体摸索

15.洗脫完成后关掉电源,反转电极方向(正对负)再运行10-15秒钟以去除吸附到玻璃纸上的蛋白

16.关闭电泳仪,拔出洗脫仪电极,注意不用打开洗脫仪

收集

17.輕輕撕去收集孔上封的膠帶

18.准備好收集器,標准型用30個12x75mm試管,迷你型用14個1.5ml離心管(不帶蓋的),合上收集器蓋,將收集器和一真空泵連接。

19.将收集器上的一排针插入洗脫仪左边的收集孔(不带数字标记),拧紧针边的两个螺丝

20.先完全打开真空控制阀,再打开真空泵,慢慢关上真空控制阀,以平稳地吸出洗脫液

21.如实验室没有真空泵,可进行手工收集。用合适大小的吸管,从洗脫仪右边的收集孔(带数字标记)轻轻吸取洗脫液

清洗

22.每次使用后立即用去污剂/蒸馏水彻底清洗洗脫仪和收集器
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